فنآوری فلوسایتومتری
علی اصغر صفری فرد، کارشناس ارشد خون شناسی و بانک خون
safarifardas@gmail.com
تصویر شماره یک
مقدمه
روش رایجي كه بيشترر توط مقققي هت تشيي طوو هاي طبيعي و نئوپلاطريک بر روي لام فيكس
شتده صتورم ميگيرد، بر اطتاا ارایابيهاي طتيروژو یكي و شتكظ هاهري رمرفوژو يآ هنتا مبر ي اطت
مريصتصتي هطي ش اطي عويرغم تتيه رنگهاي مر وع هت رنگهميزي طوو هاي ميروف یک باف ، به
طتتوژ و به طرع قادر به شمارش انواع طوو هاي موهود در مقطع باف مورد مطاژعه نيسر د و همچ ي
نميتوان د طتوو هایي را كه داراي م شتا اهدادي گوناگوو و یا در مرا ظ ميروف تمایز هستر د، تشتيي
ده د در طي طتتا هاي دهة 06ميلادي تلاش همعي اا دانشتتم داو در امي ههاي ميروف م جر به ابداع
تك يک فووطتایرومرري گردید، كه ای تك يک در امي ه برطرف نمودو مشتكلام فو اا توانایيهاي خاصي
برخوردار اط
طتتيرومرري رCytometryآ یا یاخره طتت جي به مع ي تيكيک اهزاس طتتووژي مرعدد در یک نمونه اطتت
دطرگاه فووطایرومرري اهزاس مرعدد طووژي را تعيي كرده و هماماو مورد شمارش قرار ميدهد خصو هایي
2 www.padtan.com
PADTAN ELM HTTPS://TELEGRAM.ME/PADTANELM پادتن علم
كه توطت فووطتایرومرري قابظ اندااهگيري هستر د، شتامظ اندااه طتوو ، پيچيدگي طيروپلاطمي، مقروي
DNAیا RNAطوو و طيف گسرردهاي اا پروتئي هاي داخظ طووژي و یا مرصظ به غشاس ميباشد
در روش فووطایرومرري طوو هاي رنگهميزي شده رچه به وطيوه م وكوونا هنريبادي مرصظ به فوورط و
چه فووروكرومهاي مرصتظ شتونده به اهزاس طتووژيآ در یک هریاو طيا قرار گرفره و به صورم تک تک اا
مقابظ پرتوي نوري رژيزرآ عبور ميك د و مرعاق هو، نور پراك ده شتتده و نور فوورطتتانس هانبي توطتتت
هشتكارطااها همعهوري ميشوند ای هشكارطااها، طيگ ا هاي نوري را به طيگ ا هاي اژكرریكي مر اط با
نور همعهوري شده تبدیظ ميك د پراك ش نور در ااویههاي ميروف ميتواند طوو ها را بر اطاا تياوم در
اندااه و پيچيدگي دروني اا هم مرمایز ك د، در اژي كه طاطع شدو نور فوورطانس اا هنريبادي نشاندار شده
با فوورط ميتواند طوو ها را بر اطاا تياوم در هنري وهاي ططقي و طيروپلاطمي اا هم تيكيک نماید
بدی ترتي طتوو ها بر اطاا خصوصياتي نظير جم، گرانولاطيوو و ميزاو رنگ پذیري اا هم افررا داده
ميشوند
در طو طتاژياو گذشره، ایمونوف وتایپي گ توط فووطایرومرري، كمک بسياري در تشيي ، طبقه ب دي و
پيگيري بعد اا درماو طتترطاوهاي خوو كرده اطتت امرواه اطتتاا طبقه ب دي بدخيميهاي خوو بر پایه
خصتتتوصتتتيام طبيعي طتتتوو هاي ردههاي ميروف در مرا ظ بووغ ميباشتتتد ایمونوف وتایپي گ توطتتت
فووطتایرومرري روشتي طتریع و هطتاو اطت ای روش با خصتوصي م قصر به فردي كه دارد، طوو هاي
ميروف را بر اطاا هناژيز چ د پارامرري تشيي ميدهد
فووطتایرومرري نقش متمي در امي ههاي ميروف هطتي شت اطتي، هماتوژو ي، ایم ي ش اطي، بيماريهاي
عيوني، بررطتي پيوند اعاتاس، نئوپلاایا و نريک دارد و اا طرفي بررطي وقایع چرخة طووژي و نقای موهود
در DNAهت تشتيي انواع ژوكميها و ژ يومها بوطتيوة فووطتيرومرري امكاو پذیر اطت همچ ي ای
روش در تشتتتيي بيمتاريهتا، تعيي پيشهگتي و هم براي ارایتابي درمتاو بتدخيميهتا كتاربرد دارد
فووطتایرومررهاي كوي يكي معمولا براي اطترياد هامایشگاههاي كوي يكي ت ظيم شده اط، اما بعاي اا هنتا
هرفي هداطتتااي رSortingآ انريابي طتتوو ها را دارا ميباشتت د كه در كارهاي تققيقاتي مورد اطتترياده
هستر د پيشترف هاي هماماو در وطایظ و تجتيزام، توژيد هنريباديهاي م وكوونا ، رنگهاي فوورطانس،
كامپيوتر و نرمافزار، دریچة هدیدي هت اطتترياده اا تك يک فووطتتایرومرري، در هامایشتتگاههاي كوي يكي
گشوده اط
در فووطتایرومرري مدرو، مجموعهاي اا ف هوريهاي گوناگوو براي طت جش طتوو ها و بررطي طاخرماو و
مقرواي دروني هنتتا بكتار گرفرته شتتتده اطتتت در ای روش ري ترام كوچكرر اا 6/1ميكرومرري قابظ
تشتيي بوده و هطترانه رنگ ط جي هو دود 1666موژكو رنگ یا 1×16-11گرم رنگ به اااي هر طوو
اطت بدی ميتوم كه اگر یک گرم رنگ در جمي به ابعاد 0666Km × 0666 Km × 066mظ شتود،
دطرگاه قادر به تشيي هو ميباشد
3 www.padtan.com
PADTAN ELM HTTPS://TELEGRAM.ME/PADTANELM پادتن علم
کاربردهای فلوسایتومتری
به طور كوي كاربرد پزشكي فووطایرومرري را ميتواو در چتار مورد خلاصه كرد:
تشتيي و طبقه ب دي طترطاوهاي خوو رتوانایي تشيي دقيق همعي هاي طووژي غيرطبيعي
همراه با تعيي رده و ميزاو بووغ طوو هاآ
طت جش فاكرورهاي بيوژو یكي و اتور بعاتي موژكو هاي اخرصتاصتي كه در تعيي پيشهگتي
بيماري نقش دارند
ش اطایي هنري وهایي كه به ع واو هدفهاي درماني اطرياده ميشود راطرياده اا هنريبادي بر عويه
هنري وهاي خاص كه طوو بدخيم هو را بياو ميك دآ
شت اطتایي طوو هاي باقي مانده بدخيم در طو درماو كه در تعيي پاطخ به درماو و ا رما عود
بيماري بسيار متم هسر د
مزایای سيستم فلوسایتومتری بر سایر روشهای اندازهگيری فلوروسانس
Objective – عي ي بودو1
-2ساطي بالا ردطرگاه ميتواند تا بيش اا هزار موژكو فووئوروكروم را در طوو مشي ك دآ
-0طرع عمظ ایاد كه بررطي تعداد ایادي طوو را ممك ميطااد ر 1×165طوو در هر دقيقهآ
-4توانایي تشيي طوو هاي نادر با مشيصام اخرصاصي در یک همعي هررو و و ناهمگ
-5توانایي مطاژعة طوو هاي اند فيكس نشده
-0توانایي اندااهگيري معيارهاي همزماو چ دی پارامرر و تطابق چ د ساطي هر طوو معوق در مایع
اصول
4 www.padtan.com
PADTAN ELM HTTPS://TELEGRAM.ME/PADTANELM پادتن علم
تصویر شماره دو
تك وژو ي فووطایرومرري بر اطاا خصوصيام فيزیكي و شيميایي طوو ها یا دیگر ترام ميباشد، ه گامي كه
ای طوو ها یا ترام اا مقابظ یک طيسرم هشكارطااي نوري Photo Detectorعبور ميك د، ارایابي
ميگردند اا هو هایي كه هر طوو وقري اا هوو طيسرم گذر مينماید، به ت تایي اندااهگيري و هناژيز ميشود
و همچ ي به طب ای كه اندااهگيريهاي مرعدد و ميروف در اماو وا د انجام ميشود، ب ابرای پارامررهاي
ميروف چ د هزار طوو در طو مدم اماني بسيار كوتاهي مقاطبه ميگردد بطور كوي ای كه، دطرگاه
فووطایرومرري به نقوي طرا ي شده اط كه قادر اط تعداد ایادي طوو و ترام بيوژو یكي مان د هسرههاي
هدا شد طووژي، كرومواومها و ميكروارگانيسمها را در مقي مایع با اطرياده اا اشعة ژيزر، هناژيز نموده و
خواص فيزیكي هنتا مان د اندااه نسبي و ميزاو گرانوژيري طيروپلاطم را مشي نماید باید دانس كه
فووطایرومرري قادر اط تعداد 1طوو طرطاني در مياو 16666تا 166666طوو عادي موهود در نمونة
مغز اطريواو را ش اطایي ك د
در اثر تابش اشعة ژيزر به طوو ها و بر س اندااه و طاخرماو داخوي هنتا، طيگ ا هاي نوري اصظ ميشود
كه بوطيوة تقوی ك دههاي نوري PMT = Photo Multiplier Tubeدطرگاه به طيگ ا اژكرریكي
تبدیظ ميگردد و پس اا هناژيز بوطيوة كامپيوتر به شكظ نمودار نمایش داده ميشود چ انچه طوو ها به وطيوة
رنگهاي اخرصاصي DNAو ،RNAپروتئي ، شاخ هاي ططح طوو ها و اهزاي دروو طووژي رنگهميزي
شده باش د، در اثر تابش اشعة ژيزر، فووروكروم مرصظ به هنتا تقریک شده و در برگش به اژ پایدار اوژيه،
طيگ ا هاي فووئورط خاص با طو موج هذبي ميصوص خود ایجاد مينماید ای طيگ ا فوتوو نوري،
داراي طو موج بالایي بوده و انر ي تابشي دارد كه مير رنگ هو اط طيگ ا هاي فو نيز به طيگ ا هاي
5 www.padtan.com
PADTAN ELM HTTPS://TELEGRAM.ME/PADTANELM پادتن علم
اژكرریكي تبدیظ گردیده و در نريجه كوية مشيصام طووژي، اعم اا گرانوژيري، طاخرماو دروو طيروپلاطم و
شاخ هاي مورد نظر ططقي طوو به طور همزماو بصورم نمودار گزارش ميشوند
آماده سازی نمونه
براي انجام هر نوع فووطایرومرري ابردا باید طوو ها را هماده كرد، به طوري كه طوو ها به صورم تكي درهمده
و در مقي م اطبي معوق شده باش د بعاا یک مر وه تيوي براي بالا بردو غوظ طوو هاي مورد نظر در
نمونه ضرورم پيدا ميك د روشهاي ميرويي براي تتيه، تيوي وهماده طااي طوو وهود دارند و روش
انرياب شده به نوع طوو مورد ارایابي بسرگي دارد پس اا تتيه طوطپانسيوو م اط، طوو ها باید با مواد
فوورطانس رنگ شوند و یا با هنريباديهاي كونژوگه با فووروكروم نشاندار شوند روش نشاندار كردو تق تاثير
فاكرورهاي ایادي مان د ميزاو اخرصاصي بودو هنريبادي و غوظ هنري و در ططح یا داخظ طوو ، م اط
بودو غوظ هنريبادي مورد اطرياده و بكار بردو ك رر هاي مثب و م يي م اط در هناژيز طوو ها قرار
ميگيرد
Hydrodinamic Focousing تمرکز هيدرودیناميک
تصویر شماره طه
خصوصي اصوي یک طيسرم فووطایرومرري ای اط كه اندااهگيريها بر روي نمونههاي طووژي كه در دطرگاه
هریاو ميیاب د، انجام ميشود اگر اا یک ژوژه هت انرقا نمونه اطرياده شود، طوو ها نميتوان د به طور
مكرر به نقطه اندااهگيري رمقظ برخورد ژيزر به طوو آ بروند اگر اا ژوژههاي باریک هت اطمي او اا انرقا
تكرار پذیر طوو ها اطرياده شود، ا رما دارد با عبور طوو هاي بزرگرر مسير بسره شود براي ظ ای مشكظ
اا روش ” تمركز هيدرودی اميک “Hydrodinamic Focousingكمک گرفره ميشود در ای روش
هریاو هرامي اا طوو ها را به دروو هریاو امظ طریع رSheath fluidآ وارد ميك د مایع امظ، طوو ها
را در مركز ژوژه مرمركز ميك د، ب ابرای طوو ها به طور م ظم و در یک مسير مجااي به نقطه اندااهگيري
م رقظ ميشوند
هدف اا هماده طااي نمونه، تتية یک طوطپانسيوو اا پارتيكظهاي م يرد اط كه به روش خاصي رنگهميزي
شتدهاند تا در طيسرم، بدوو ایجاد اخرلا در هریاو یك واخ مایع رطيا آ و یا انسداد ژوژه و م افذ دطرگاه
عبور ك د در طيستترم فووطایرومرري، طتتوو هاي معوق در متتایع ایزوتونتتيک اا طریق طيسرم سي با
فشار هوا اا هرف تتتتتتاوي نمتتتتتتونه به ژوژة ميتتتتتتصوصي م رقظ شده و به یک مقيظة خاصتتتي به نام
« ير هریاو» Flow chamberوارد ميشتوند، مایع پوشتشي Sheath fluidدر ير نمونه، یک اثر
تمركز هيدرودی اميكي ایجاد كرده و نمونه را به داخظ هریاو ميكشتاند كه ایادتر بودو طرع هریاو مایع
پوشتشتي نسب به مایع اوي نمونه، طب هدای طوو ها به صورم م يرد رتکتکآ هت عبور اا طوراخ
انرتایي ميشود تا در نقطة خاصي در مقابظ اشعة ژيزر قرار بگيرد طوو اا ژوژه شيشهاي با طرعري دود 5
تا 56مرر در ثانيه اا مياو م يذي باریک و اا مقابظ پرتوي یک یا چ د م بع نوري كه غاژبا ژيزر اط، عبور
ميك تد بتدی ترتيت امكاو همعهوري اطلاعام مربوط به 5666تا 56666طتتتوو در هر ثانيه فراهم
ميشود
فلورسانس
فووطایرومرري بر خصوصيام پراك ده طااي نور توط طوو ها و نيز بر نشر فوورطانس اا هنتا اطروار اط
نشر فوورطانس با اطرياده مسرقيم اا مواد رنگ ك ده فوورط اصظ ميشود ردر ای روش كه مسرقظ اا
هنريبادي اط، غاژبا اا فووكرومهاي مرصظ شونده به RNA ، DNAو یا دیگر اهزاي طووژي اطرياده
ميشودآ یا تركيبي اا رنگ فوورط با هنريباديهاي مونوكوونا كه تق نام عمومي كونژوگه مورد اطرياده
قرار ميگيرد در ای اژ انرياب مقظ اتصا به طوو ، توط هزس هنريبادي موهود در كونژوگه صورم
ميگيرد و ای هنريبادي اط كه به صورم كاملا اخرصاصي، هنري و هدف را بر روي طوو یا در داخظ هو
ش اطایي كرده و به هو مرصظ ميشود و هزس فوورط موهود در كونژوگه ابزاري براي ردیابي مقظ و ميزاو
هنريباديهاي مرصظ شده به هدف ميباشد
سيستم نوری
طيسرم نوري فووطایرومرر مرشكظ اا یک یا چ د م بع نوري به همراه یک طري اا عدطيها، فيوررها و
هشكارطااها اط عدطيها و فيوررها هت انرقا نور م بع به نقطه اندااهگيري و نيز براي انرقا نور پراك ده
و فوورطانس اا نقطه اندااهگيري به هشكارطااها به كار ميروند
الف) منبع نور:
انواع ميرويي اا م ابع نوري براي فووطایرومرر وهود دارند در فووطایرومررهاي مدرو، نور ژيزر به ع واو م بع
نوري بكار ميرود، ژيزر نسب به هيوه یا لامپهاي دیگر مزایایي دارد كه اا هو هموه ميتواو به توژيد نور
م وكروم رتک رنگآ و با انداا نقطهاي بسيار كوچک هو اشاره كرد، ای انداا نقطهاي بسيار متم اط، ایرا
هرچه نور در فااي كوچکتري مقدود شود، ميزاو تتييج طوو به د ماكزیمم نزدیكرر ميشود، علاوه بر
ای باعث اطمي او اا قرار گرفر ت تا یک طوو در برابر نور در هر ژقظه ميگردد بيشرری ژيزر مصرفي نيز،
ژيزر هرگوو با طو موج 411نانومرر ميباشد كه با هوا طرد ميشود، ارااوتر هم بوده و قابظ دطرراتر اط
ژيزرهاي دیودي نيز به دژيظ پایداري و قيم ارااو مورد اطرياده قرار ميگيرند و معمولا طو موج رششصد
و طي و پ جآ نانومرر هو مورد اطرياده اط
ب) فيلترها:
طيسرم نوري فووطایرومرر، طيگ ا هاي فووئورطانس طاطع شده اا طوو ها را به یک طيسرم اژكررونيكي
هدای ميك د، ای طيسرم اا یک طري فيوررهاي ميصوص هذب نور و هی ههاي Dichoricیا دو رنگ نما
تشكيظ شده اط فيوررهاي نوري، فق طو موج خاصي را عبور داده و مانع عبور طایر طو موجها ميشوند
فيوررهاي دو رنگ نما، هی ههاي انريابي هسر د كه اهااه عبور طو موجهاي بو د را ميده د و طو موجهاي
كوتاه را م عكس ميك د فيورر باند عبوري هت عبور باند باریكي اا طو موج بي 026 – 046نانومرر
طرا ي شده اط فيوررهاي هذب نور در ااویة 90 oنسب به مسير تابش اشعة ژيزر قرار گرفرهاند و هی ههاي
Dichoricنسب به فيوررها در ااویة 45Oقرار دارند علاوه بر ای دتكرورهاي خاصي به م ظور دریاف
طيگ ا هاي اصظ اا انداا طوو و گرانوژيري در ای طيستتتتتترم وهود دارند كه اصطلا ا Fs sensorو
SS sensorناميده ميشوند به مجرد عبور یک طوو اا مقابظ اشعة ژيزر، چ دی پارامرر فيزیكي و
فووئورطانس هو، بطور همزماو اندااهگيري ميشود
ج) آشكارسازها:
با عبور ترام یا طوو ها اا مقابظ پرتو ژيزري، موژكو هاي فوورطانس ططح طوو، فوتووهایي با طو موج
خاص در همه هتام تابش ميك د طيسرم اپريكي بيشي اا ای فوتووها را به هشكارطااها رDetectorآ
ميرطان د فوتودیودها رPDآ و فوتوموژري تيوبها رPMTآ به خاطر ساطي بالاي هوها به ع واو هشكارطاا
اطرياده ميشوند ابردا فوتووهاي رطيده اا نمونه توط هشكارطااها به فوتواژكرروو تبدیظ شده و طپس
هریاو اژكرریكي هو به وژرا تبدیظ ميشود به دژيظ ای كه طيسرم اژكررونيكي، وژرا را اندااهگيري و مقایسه
ميك د، باید خروهي هشكارطاا به وژرا تبدیظ گردد تبدیظ هریاو به وژرا با عبور هریاو یا شار اژكرریكي اا
یک مقاوم انجام ميگيرد هو چه اتيا ميافرد بر اطاا قانوو اهم قابظ پيشبي ي اط وژرا توژيد شده
برابر اصظ ضرب هریاو در مقاوم اط و چوو مقدار مقاوم ثاب اط وژرا خروهي مسرقيما مر اط
با هریاو ورودي اط مدار اژكررونيكي كه ای تبدیظ را انجام ميدهد،“تقوی ك ده -Trans
“impedenceنام دارد كه ميتواند در مدار بيش PMTهاطااي شود ای مدار هریاو فوتو اژكررووها را
به وژرا تبدیظ كرده و تقوی خطي وژرا را فراهم ميك د
پراکنش
اگر چه طوو ها به خودي خود داراي فوورطانس اندكي در برخي طو موجها هسر د اما بدوو بكارگيري نور
تتييج ك ده رژيزرآ هيچ طيگ اژي توژيد و به ردیابهاي دطرگاه ارطا نيواهد شد پس اا برخورد نور ژيزر
به طوو ها، بااتاب نور ژيزر در هتام ميروف پراك ده شده و توط ردیابهایي كه در اوایاي ميروف قرار
دارند، براي كس اطلاعام همعهوري ميشود
در صورتي كه طوو به صورم یک كر همگ و یك واخ باشد، در اثر تابش ژيزر، نور تق ااویة 360o
توط طوو پراك ده و بوطيوة هشكارطاا مسرقيم Fs sensorكه در ااویة 2-20 oنسب به مقور تابش
ژيزر قرار دارد، دریاف و اندااهگيري ميشود، ای نور اصطلا ا FALSناميده ميشود و مقدار هو رابطة
مسرقيم با انداا طوو دارد به عبارم دیگر نوري كه در هت مسرقيم پراك ده ميشود ر Forwardآ
مر اط با طایز طوو یا تره اط
مقدار نوري كه تق ااویة 90 oنسب به مقور تابش ژيزر اا طوو پراك ده ميشود اصطلا ا نور SSناميده
ميشتود و مقدار هو بسترگي به خصتوصتيام شتكست نور توطت طتوو، اهزاي دروني، ميزاو گرانوژيري
طتيروپلاطتم، طتاخرماو هستره و طتطح طوو رناهمواري غشاسآ دارد براي مثا یک گوبو قرمز رطيده با
طتيروپلاطتم همگ ، بدوو هستره و اندامکهاي طتيروپلاطتمي، نستب به یک یاخره ائوای وفيظ كه اوي
گرانو هاي طتيروپلاطتمي ایاد و هسترة مرك اا چ د قطعه اطت، تير نوري 90 oبستيار كمرري دارد
طيگ ا پراك ش نوري ،90oتوط هشكارطاا قائمه دریاف ميشود و به طيگ ا دیجيراژي تبدیظ ميگردد
اا نظر ميزاو نور ،SSژ يوطتي ها و گرانوژوطتي ها به ترتي اا كم به ایاد قرار دارند به ای ترتي مواای
FALSو SSميتواند براي مشي كردو تيپ هر كدام اا طوو ها بكار رود و رابطة هو بدی شرح اط:
گوبو هاي قرمز و نياژههاي طووژي > ژ يوطي > م وطي > گوبو هاي طييد چ د هسرهاي
انتشار فلوئورسانس
علاوه بر ای اگر موژكو هاي فوورط و یا فووروكرومها به طوو ها مرصظ شده باش د، توط نور تابيده تتييج
شده و بااتابي اصظ ميشود كه طایر ردیابها و فيوررهاي نوري هو را هذب ميك د موژكو هاي فوورط
ميتوان د مرصظ شده به هنريباديها، رنگهاي ساا به ++ Caو مرصظ شده به اهزاي طووژي، موژكو هاي
فوورط ري كه توط طوو بروا داده ميشوند و رنگهاي مرصظ شونده به DNAباش د نريجه دقيق، بررطي
چ د پارامرري هر تره یا طوو اط و تعداد پارامررهاي بررطي شده بسرگي به تعداد موژكو هاي فوورط ري
دارد مورد اطرياده قرار گرفره اط
هشتكارطتاا فوورطتانس، امواج فوورطتانس م رشتره اا برخورد نور ژيزر به فووروكرومهاي مرصتظ به طوو را
دریاف ميك د ای هشتتكارطتتاا در ااویه 90oنستتب به م بع نوري یع ي روبروي هشتتكارطتتاا قائمه قرار
ميگيرد در صتورم مطاژعه هماماو چ د فووروكروم كه به اهزاس ميروف طووژي مرصظ شدهاند، ميتوانيم اا
چ دی هشكارطاا فوورطانس اطرياده ك يم
بر اطتتتاا پتارامررهتاي تير نوري ر FALSو SSآ ميتواو gateهتاي اژكررونيكي رمقتدودههتاآ بتدور
دطترههام طتووژي مورد نظر براي تجزیه با فوورطت كشتيد، هنگاه فووئورطانس طوو ها در نمونه ميتواند
بطور انريابي تعيي شود و بصورم توایع كثرم ترطيم گردد كويه اطلاعام توط یک كامپيوتر كه در یک
طيسرم گ جانيده شده اط، همعهوري، مقاطبه و تخيره ميگردد
غتاژبتا جم مورد نيتاا اا نمونته موردهامتایش نيز خيوي كم و دود 166ميكروژيرر ميباشتتتد بررطتتتي
فووطایرومرریک هرچه اودتر باید انجام شود رپس اا نمونهگيريآ، بتر ا نمونهها را ميشود براي 24طاع
در دماي اتا رميصتوص خوو كامظآ و یا 4oCرميصتوص طوو هاي م ونوكوئر هدا شدهآ نگتداري نمود و
طپس ایمونوف وتایپي گ انجام داد در ه گامي كه نمونهها براي بيشرر اا 24طاع نگتداري ميشوند، اضافه
كردو مقي كش طووژي، مان د RPMIضروري اط
فلوروکرومها
براي انجام فووطایرومرري لاام اط كه ابردا طوو ها با فووروكرومها نشاندار شوند اا طرفي براي نشاندار كردو
اهزاس داخوي طوو باید اقدامام خاصي را انجام داد تا هنتا در دطررا هنريبادي یا ماده فوورط قرار گيرند
تعداد فووروكرومهاي مورد اطرياده براي فووطایرومرري در طي طاژياو مرمادي مرتبا افزایش یافره اط و ای
ا رما وهود دارد كه در هی ده، تعداد فووروكرومهاي مورد اطرياده براي هناژيز طوو ها بيش اا ای نيز افزایش
یابد ش اخ انواع فووروكرومها و هگاهي اا مزی ها و معای هر كدام ت تا راه اطرياده بتي ه اا هنتا براي
دطريابي به مقاصد عومي تققيقاتي اط امرواه پرمصرفتری رنگهاي فووئورطاو مرصظ به هنريباديها در
فووطایرومرري باژي ي، فووئورطي ایزوتيوطيانام ) (FITCو فيكواریرری ) (PEميباش د تمامي ای
رنگهاي فووئورطاو در مقدود 488nmطيفهاي هذبي دارند ب ابرای، یک، تک طو موج تقریكي ژيزري،
ميتواند تمامي ای دو رنگ را تقریک ك د
فووطتتتایرومررهتاي اوژيته قتادر بودنتد فق یک یا دو رنگ فوورطتتتانس را تجزیه و تقويظ ك د اما امرواه
دطرگاههایي عرضه شدهاند كه قادرند چ دی رنگ فوورطانس رابه طور هماماو ردیابي و تجزیه و تقويظ
ك د پيشترف هاي همزماو در وطتایظ، توژيد هنريباديهاي م وكوونا ، رنگهاي فووئورطتانس، كامپيوتر و
نرمافزار، دریچة هدیدي هت اطرياده اا تك يک فووطایرومرري، در هامایشگاههاي كوي يكي گشوده اط
سيستم کامپيوتری
ای طيسرم، پاژسهاي دیجيرا هشكارطااها را دریاف كرده و به هناژيز دادهها ميپردااد امرواه نرمافزارهاي
هدیدي براي هناژيز طتتریعتر دادهها در دطتتررا ميباشتت د همچ ي ك رر قستتم هاي ميروف دطتترگاه
فووطایرومرري بر عتده ای طيسرم ميباشد
اهميت فلوسایتومتری در بررسی فنوتيپ سلولها
تصویر شماره چتار
هنري وهاي طتووژي كه اصتطلا ا به نام (CD) clusters of Differentiationناميده ميشتود، صترفا
شاخ هاي ش اطائي انواع ميروف طووژي نيسر د، بوكه فعاژي هاي متم طووژي را ت ظيم ميك د و اكثرا اا
ه س پروتئي یتا گويكوپروتئي هستتتر د، ای موژكو ها به ع واو گيرندههاي فاكرورهاي اصتتتوي رشتتتد،
طتتيروكي ها و پروتئي هاي طتترمي عمظ ميك د و یا به ع واو هنزیمهاي غشتتائي فعاژي نموده و اتصتتا
طتوو ها را به طتایر طتوو ها و اهزاس ماتریكس خارج طتووژي ميسر مينمای د، ای شاخ هاي ش اطائي به
وطتيوة مردهاي فووطتایرومرري به را ري قابظ تشتيي و ارایابي ميباش د بررطي شاخ ها هت افررا
همعيت هاي طتتتووژي خاص نيز بكار ميرود و ميتواو بدی طریق با توهه به ای شتتتاخ هاي هنري ني،
طتتوو ها را اا یكدیگر تيكيک كرد همچ ي امرواه با تك يک فووطتتایرومرري Fluorescence FACS
Activated Cell Sorterعلاوه بر خصتوصيام طوو ها، ميتواو طوو ها را اا یكدیگر تيكيک نموده و در
ژوژههاي همع ك ده ميصوص هر نوع طوو همعهوري نمود و بر روي هنتا تققيقام انجام داد
طتوو ها اا اهزاس ميرويي مثظ غشتاس طتيروپلاطمي، غشاس هسرهاي، هسره و طيروپلاطم تشكيظ ميشوند و
تقریبا همه موژكو هاي موهود در قسم هاي ميروف طوو را ميتواو با اطرياده اا فووطایرومرري ردیابي و
تعيي مقدار نمود معمولا موژكو هاي طتتطقي موهود در غشتتاس طتتيروپلاطتتمي به را ري در دطتتررا
هنريبادي قرار ميگيرند وژي براي رطيدو هنريبادي یا ماده فوورطانس به موژكو هاي دروني طوو روشهاي
مطمئ و مؤثري لاام اطت هر طتووژي بر ست نوع و تيصتصي كه به عتده دارد موژكو هاي مير به
خود را بياو ميك د؛ بدی مع ي كه همة وها در همه طوو ها بياو نميشوند بوكه بر س وهييهاي كه در
طي تمایز بر عتده طتوو گذاشتره شتده اطت و بر ست مقيطي كه در هو قرار ميگيرد هر طووژي خود
انرياب ميك د كه در پاطتخ به شرای مقيطي كدام و را فعا طااد ب ابر ای ردیابي پروتئي هاي طووژي
اصتظ اا بياو وها هم در طتطح و هم در دروو طوو ميتواند وطيوهاي بسيار مييد براي ش اطایي طوو
باشتد موژكو هاي طتطقي طوو ها تق نام عمومي CDكه مييف Cluster Differentiation
ميباشتد شت اخره ميشتوند و براي ردیابي هوها اا هنريباديهاي م وكوونا كونژوگه با فووروكروم اطترياده
ميشتود مثلا ماركرهاي ططقي طوو هاي NKعبارت د اا CD16و CD56كه هنريباديهایي با
همي نام قادرند ای موژكو ها را در طتطح طتوو ش اطایي نمای د اغو ژيآ هنريبادي در گيرار یا نوشرار
ذف ميشتود مثلا كونژوگه CD16 هماو هنريبادي شت اطتایي ك ده CD16ميباشتد كه مرصظ به
فووروكتتتتتتتتروم اط ، یا كونتتتتتتتتتتتتتتژوگه CD34اشاره به هنريبادي ش اطایي ك د CD34دارد
كه با فووروكروم م اطبي كونژوگه شده اط ، ماركر اخرصاصي طوو هاي ریشهاي تمایز نيافره مغز اطريواو
ميباشد
جداسازی سلولی
تصویر شماره پ ج
بيشترری متورد اطترياده اا فووطتایرومرري، ارایتابي هنرتي وهتاي طتطقي بيتاوشتده بتر روي طتوو هتا
ميباشد، اما عتلاوه بتر هو طتوو هتا ممكت اطت بتا روشهتاي ميروتف بتراي انتدااهگيتري خصوصتيام
عموكردي بوطيوة فووطایرومرري مورد بررطتي قترار گيرنتد متيتتواو تغييترام امتاني بيتاو گيرنتدههتا را
تعيي كرد یا بر همك ش یتک نتوع طتوو را بتا طتوو دیگتر انتدااهگيتري نمتود بعتلاوه، امكتاو ارایتابي
تغييرام در فعاژي هنزیمهتا و پرانستيظ غشتایي وهتود دارد همچ تي متيتتواو هامایشتاتي بتراي نشتاو
دادو فاگوطيروا و هاادطااي موژكو هاي فعا ایسري انجام داد
روش هداطااي طوو ها با اطرياده اا خصوصيام فوورطانس هنتا توط ایمونوژو یس هایي ابداع شد كه تلاش
ميكردند همعي هاي خاژ طوو ها را اا نمونههاي ميرو تتيه كرده و پس اا تكثير هنتا در مقي كش
طووژي، نقش مجزاي هر طوو را در طيسرم ایم ي بررطي نمای د هداطااهاي هریاني وطایوي ضروري و
پرطرفدار در عووم بيوژو یكي و عووم دیگر هسر د كارهیي اصوي ای هداطااها، چ انچه اا نامشاو برميهید،
هدا كردو همعي هاي طووژي دژيواه اا مياو همعيري هررو و اا طوو ها براي مطاژعة بيشرر ميباشد بطور
كوي اگر طوو یا ترهاي داراي خصوصيام م قصر به فردي اا نظر فيزیكي یا شيميایي باشد با اطرياده اا هو
خصوصيام ميتواو برا ري هو را ش اطایي كرده و اا دیگر طوو هاي همراه هدا كرد
با اطرياد هماماو اا دو روش هناژيز طووژي و هداطاا طووژي Cell Sorterامكاو مطاژعة بيشرر و كش
طوو هاي كاملا ش اخره شده اا نظر ف وتایپي یا رفراري فراهم ميگردد در اور یووهاي كوسيم خصوصيام
طييي برخي اا رنگهاي فوورط تغيير ميیابد اا ای رنگها براي اندااهگيري تغييرام غوظ كوسيم اهزاس
طووژي در ه گامي كه طوو ها بوطيوه انواع مقرکها تقریک ميشوند اطرياده ميشود
کنترل کيفی
داشر برنامههاي ك رر كييي براي روشها و تجتيزام در هر نوع فووطایرومرري ضروري بوده و یک نياا
اطاطي مقسوب ميگردد ای برنامهها براي اطمي او اا كييي نرایج بدط همده به كار برده ميشوند
همچ ي برنامههاي ك رر كييي بایسري مرتبا و در د كيای انجام شوند تا تشيي نقاط اشكا به هطاني
ممك گردد بدی م ظور، برنامة ك رر كييي در هر دوامي ة ك رر كييي داخوي و روشهاي ارایابي
كييي خارهي، باید به اهرا گذاشره شوند
در فووطایرومرري طي دو مر وة همعهوري اطلاعام و مر وة هناژيز اطلاعام امكاو خطا وهود دارد كه با
بكارگيري روش صقيح تتية نمونه طووژي و ت ظيم دقيق دطرگاه ميتواو اا خطاهاي مربوط به مر وة
همعهوري اطلاعام هووگيري كرد اما توانایياپراتور در طرا ي صقيح هامایش، ت تا ه بهاي اا كس
اطلاعام اط كه براي هو روشهاي ك رر خطا وهود ندارد بدی مع ي كه انرياب هنريبادي م اط و
انرياب فووروكروم مر اط با غوظ و موقعي هنري و نياام د تجربيام و اطلاعاتي اط كه باید توط مققق
كس شوند
روش فووطایرومرري در طایة افزایش روا افزوو تعداد هنريباديها، تررامرها و رنگهاي توژيد شده براي اطرياده
در ارایابي فعاژي طوو ها به ع واو یک ابزار متم در مطاژعة طوو هاي طيسرم ایم ي در همده اط
فووطایرومرري چ د رنگي ای امكاو را فراهم هورده اط كه انواع طوو هاي موهود در نمونة خوو یا طوو هاي
كش شده به تيكيک مورد ارایابي قرار گيرند طوو هاي تق مطاژعه با اطرياده اا هنريباديهاي اخرصاصي
PADTAN ELM HTTPS://TELEGRAM.ME/PADTANELM پادتن علم
معرف ایرگروههاي طووژي، ش اطایي ميشوند و خصوصيام رفراري هنتا نيز با اطرياده ااهنريباديهاي
اخرصاصي رمثلا ضد طایروكي آ و یا رنگهاي ارایابي ك د يام طووژي تعيي ميشوند
دیدگاهتان را بنویسید